Badanie aktywności hemolitycznej białek

Metoda hemolizy kontaktowej (zmodyfikowana procedura Sansonetti i wsp.)

1. Komórki C.jejuni (10 9 CFU) zawiesić w buforze PBS
2. Dodać erytrocytów baranich do końcowego stężenia 0,5%
3. Całość odwirować i inkubować 16 godzin w 42°C, w warunkach 10% CO2, 5% O2 i 85% N2
4. Osad zawiesić, ponownie wirować do odczytu pobierać supernatant. Wynik odczytywać spektrofotometrycznie przy długości fali 545nm

Kontrola: 0% hemolizy -> 0,5% erytrocytów zawieszonych w buforze PBS, 100% hemolizy ->0,5% erytrocyty zawieszone w wodzie.

Badanie aktywności hemolitycznej oczyszczonych białek

1. Otrzymane rekombinowane białka dodawać w różnych stężeniach do 1ml 0,5% roztworu krwinek baranich w PBS o różnym pH
2. Całość inkubować w 37°C przez 16 godzin
3. Całość wirować do odczytu pobierać supernatant. Wynik odczytywać spektrofotometrycznie przy długości fali 545nm

Kontrola: 0% hemolizy -> 1% erytrocytów zawieszonych w buforze PBS, 100% hemolizy ->1% erytrocyty zawieszone w wodzie.

Autor: dr Agnieszka Sałamaszyńska-Guz