Bankowanie i rozmrażanie linii komórkowych

Bankowanie komórek

1. Przepłukać butelki hodowlane sterylnym PBS
2. Wlać do butelek trypsynę w ilośći pozwalającej na pokrycie całej powierzchnii rosnących komórek
3. Komórki umieścić w 37°C i inkubować ok 3 minut, nieodklejone komórki odkleić "odstukując" butelkę
4. Dolać do butelek świeżą pożywkę z surowicą i całość odwirować 1000g x 5 min. w temperaturze pokojowej
5. Osad komórek delikatnie zawiesić w roztworze do zamrażania (10% DMSO w pożywce hodowlanej) i przenieść do specjalnych 1.5-2 ml próbówek wytrzymujących temperaturę ciekłego azotu, gdzie komórki będą przechowywane
6. Przed przeniesieniem do ciekłego azotu komórki poddać zamrażaniu wstępnemu w temp. -70°C.

Rozmrażanie komórek

1. Wyjęte probówki zawierające zamrożone komórki ogrzać do momentu rozmrożenia komórek i ich zawiesinę przenieść do butelek z nową pożywką hodowlaną
2. Następnego dnia zmienić pożywkę i prowadzić hodowle.

Autor: dr Joanna Skubis-Zegadło