Immunofluorescencyjne barwienie z użyciem metanolu.

1. Utrwal komórki w -20ºC metanolu przez okolo 1-2.5 minuty.
2. Wypłucz komórki TBS.
3. Permeabilizuj z TBS-0.5% Triton X-100 przez 10 minut.
4. Wypłucz komórki w TBS-0.1% Triton X-100 (3 razy po 3-5 minut) Blokuj w 2% BSA/TBS-0.1% Triton X-100 przez 10 minut.
5. Inkubuj pierwszorzędowe przeciwciało przez 1-1.5 godziny (przygotowane w 2% BSA/TBS-0.1% Triton X-100)
6. Wypłucz w TBS-0.1%Triton X-100 (5 razy po 5-15 minut).
7. Dodaj drugorzędowe przeciwciało w odpowiednim rozcieńczeniu i inkubuj 45 minut.
8. Przepłucz TBS-0.1% Triton X-100.
9. W celu wybarwienia jader (jeśli potrzeba) inkubuj z 1-10ug/ml DAPI lub Hoesht w 2% BSA/TBS-0.1% Triton X-100 przez 10 minut.
10. Wypłucz TBS.
11. Analizuj w mikroskopie.

Autor: dr Joanna Skubis-Zegadło