Metody

Immunofluorescencyjne barwienie z użyciem metanolu.

  1. Utrwal komórki w -20ºC metanolu przez okolo 1-2.5 minuty.
  2. Wypłucz komórki TBS.
  3. Permeabilizuj z TBS-0.5% Triton X-100 przez 10 minut.
  4. Wypłucz komórki w TBS-0.1% Triton X-100 (3 razy po 3-5 minut) Blokuj w 2% BSA/TBS-0.1% Triton X-100 przez 10 minut.
  5. Inkubuj pierwszorzędowe przeciwciało przez 1-1.5 godziny (przygotowane w 2% BSA/TBS-0.1% Triton X-100)
  6. Wypłucz w TBS-0.1%Triton X-100 (5 razy po 5-15 minut).
  7. Dodaj drugorzędowe przeciwciało w odpowiednim rozcieńczeniu i inkubuj 45 minut.
  8. Przepłucz TBS-0.1% Triton X-100.
  9. W celu wybarwienia jader (jeśli potrzeba) inkubuj z 1-10ug/ml DAPI lub Hoesht w 2% BSA/TBS-0.1% Triton X-100 przez 10 minut.
  10. Wypłucz TBS.
  11. Analizuj w mikroskopie.

Autor: dr Joanna Skubis-Zegadło

Zapraszamy do dyskusji na ten temat na naszym forum http://metlab.pl/forum/topic106-immunofluorescencyjne-barwienie-z-uzyciem-metanolu.html