Metody

Izolacja plazmidowego DNA metodą lizy alkalicznej

  1. Osad z 1,5 ml nocnej hodowli bakteryjnej zawiesić w 100 µl roztworu GTE
  2. Dodawać 200 µl roztworu II, mieszać przez kikukrotne odwrócenie probówki i inkubować w temperaturze pokojowej przez 5 min
  3. Dodawać 150 µl zimnego roztworu III, mieszać i po 10 minutowej inkubacji na lodzie wirować 15 min przy 10000 rpm
  4. Do zebranego superntantu dodać zimnego 900 µl 96% etanolu, inkubować 20 min. w -20 ° C i ponownie wirować (10 min, 10000 rpm)
  5. Osad przemyć 400 µl 70% etanolem, suszyć i zawiesić w 20 µl jałowej wody.
Odczynniki:
  1. roztwór GTE
    1. 50mM glukoza
    2. 10mM EDTA
    3. 25mM Tris HCl pH 8,0
  2. roztwór II
    1. 0,2M NaOH
    2. 1% SDS
  3. roztwór III
    1. Na2HPO4*7H2O 0,06 M
    2. NaH2PO4*H2O 0,04 M
    3. pH7

Autor: dr Agnieszka Sałamaszyńska-Guz

Zapraszamy do dyskusji na ten temat na naszym forum http://metlab.pl/forum/topic45-izolacja-plazmidowego-dna-metoda-lizy-alkalicznej.html