Metoda SSCP-PCR przepis:
- Amplfikacja DNA metodą PCR z użyciem specyficznych primerów.
- Denaturacja produktów PCR: ok. 4 μl produktów PCR i 12 μl formamidu zmieszać w ependorfie denaturację prowadzić w temperaturze 95°C przez 10 minut Następnie próby schłodzić na lodzie.
- Elektroforeza: nanieś próbki na żel. Elektroforezę prowadzi się w 0,5 x buforze TBE przy natężeniu prądu od 10-12.5 voltów/cm żelu przez 2-24 godzin w temperaturze pokojowej.
- Wizualizacja: wybawienie żelu w bromku etydyny i analiza produktów w UV.
-
10 x stężony bufor TBE o pH= 8,3
- 0,890 mM Tris
- 0,890 mM kwas borowy
- 0,220 mM EDTA
- 12ml 50% akrylamid-bisakrylamid (49:1)
- 2,5ml 10% buforu TBE
- 5ml glicerolu
- 30,5ml wody bidestylowanej
Przejdź do: Metoda SSCP-PCR
Autor: dr Joanna Skubis-Zegadło
