Strącanie (precypitacja) białek acetonem.
- Do strącania białek używaj określoną ilość lizatów komórkowych (np. 50 ug białka lub odpowiadającą mu ilość komórek w buforze do lizy komórek) i dodaj co najmniej 5 objętości lodowo-zimnego acetonu.
- Inkubuj probówki do 30 minut w temperaturze -20ºC (odwracaj probówki co 5 minut).
- Zwiruj probówki 15000 obrotów/minutę przez 5 minut w temperaturze 4ºC.
- Odrzuć supernatant i pozostaw probówki do wyschnięcia (około jedna minuta).
- Ponownie zawieś wytrącone białka (biały osad) w buforze SB i inkubuj probówki przez 5 minut w 100ºC. Próbki mogą być analizowane elektroforetyczne (SDS-PAGE) natychmiast lub być przechowywać w temperaturze -20ºC.
UWAGA: Zazwyczaj pelet powstały z 50ug białek ponownie zawiesza się w 20ul buforu SB. 50ug białka to ilość wystarczająca do rozdziału elektroforetycznego i detekcji z Coomassie lub reakcji z przeciwciałami.
Odczynniki:- bufor SB 1x
- 1.51 g Trizma
- 20 ml Glicerol
- 35 ml dH20
- 4g SDS (proszek)
- 10 ml beta-Mercaptoethanolu
- 0.002g bromofenolu blue
Autor: dr Joanna Skubis-Zegadło
