Artykuły i Metody
-
Żywa fabryka – produkcja leków biotechnologicznych
Rozwój biologii molekularnej i inżynierii genetycznej doprowadził do stworzenia nowej generacji leków, zwanych lekami biotechnologicznymi. Choć pojawiły się zaledwie trzydzieści lat temu, według stowarzyszenia EuropaBio stanowią 50 proc. rozwijanych obecnie nowych terapii.
-
Barwienie jąder komórkowych z Hoechst 33258.
Hoechst – barwnik fluorescencyjny reagujący z DNA na zasadzie interkalacji. Stosowany do wybarwiania jąder komórkowych, chromosomów. Barwnik jest wzbudzany światłem ultrafioletowym przy długości fali około 345 nm (max ok 485 nm).
-
Metoda PCR-SSCP przepis
Metoda PCR-SSCP (single strand conformation polimorphism - polimorfizm konformacji pojedynczych nici) Przepis.
-
Metoda PCR-SSCP (single strand conformation polimorphism-polimorfizm konformacji pojedynczych nici)
Metoda PCR-SSCP (single strand conformation polimorphism - polimorfizm konformacji pojedynczych nici DNA). Metoda służąca do wykrywania mutacji DNA.
-
Metoda Dot blot
Metoda dot-blot służąca do identyfikacji białek, jest podobna zasadą działania do metody western blotting jednak nie wymaga przeprowadzenia wcześniejszego rozdziału elektroforetycznego białek.
-
Strącanie (precypitacja) białek acetonem.
Strącanie białek za pomocą acetonu - zagęszczanie białek - przepis.
-
Defosforylacja białek w lizatach komórkowych (alkaliczna fosfataza)
Defosforylacja białek w lizatach komórkowych z użyciem alkalicznej fosfatazy- przepis.
-
Defosforylacja białek na membranie PVDF (alkaliczna fosfataza).
Opis doświadczenia defosforylacji białek za pomocą fosfatazy alkalicznej bezpośrednio na niewysyconej membranie PVDF.
-
Defosforylacja białek z użyciem fosfatazy alkalicznej
Defosforylacja białek z użyciem fosfatazy alkalicznej może być miedzy innymi stosowana jako kontrola specyficznośći fosfospecyficznych przeciwciał.
-
Ochrona białek przed proteolizą
Podczas lizy komórek następuje aktywacja proteaz, które degradują białka. Skuteczne hamowanie aktywności proteaz to ważny krok lizy komórkowej.
-
Inhibitory fosfataz mogą wzmacnić detekcję sygnału z użyciem fosfo-specyficznych przeciwciał.
Użycie podczas reakcji western-blot inhibitorów fosfataz może wpływać na intensywność reakcji fosfo-specyficznych przeciwciał.
-
Immunofluorescencja (immunofluorescence): utrwalanie komórek i permeabilizaja błon.
Immunofluorescencyjne barwienie jest techniką pozwalającą śledzić obecność (ekspresję) lub lokalizację docelowego białka w komórce. Technika ta polega na reakcji specyficznych przeciwciał z docelowym białkiem (antygenem).
-
Immunofluorescencyjne barwienie z użyciem metanolu.
Immunofluorescencyjne barwienie z użyciem metanolu do utrwalenia komórek oraz Tritonu X-100 do permabilizacji błon.
-
Immunofluorescencyjne barwienie z użyciem paraformaldehydu (PFA)
Immunofluorescencyjne barwienie z użyciem paraformaldehydu (PFA) do utrwalenia komórek oraz Tritonu X-100 do permabilizacji błon.
-
Zdejmowanie przeciwciał (stripowanie) z membrany PVDF z wykorzystaniem NaOH.
Szybka i prosta metoda usuwania przeciwciał pierwszo i drugorzędowych z membrany PVDF przy użyciu 0,2M NaOH. Pozwala na wykorzystanie tej samej membrany do pięciu razy.
-
Hodowla komórek rosnących w zawiesinie.
Hodowle komórkowe prowadzi się w inkubatorze, w temperaturze 37°C, w atmosferze nasyconej parą wodną i 5% CO2. Komórki rosną w zawieszeniu, zwykle w grupach i dzielą mniej więcej co 24 godziny.
-
Przepis na immunoprecypitację białek (IP)
Przepis na immunoprecypitację (strącanie) białek za pomocą swoistych przeciwciał.
-
Koimmunoprecypitacja białek (pull-down)
Koimmunoprecypitacja białek jest metodą polegającą na współstrąceniu kompleksów białkowych.
-
Immunoprecypitacja białek (IP)
Immunoprecypitacja białek (IP) jest metodą w której strąca się białko docelowe za pomocą swoistych przeciwciał.
-
Wprowadzanie siRNA do limfocytów T (Jurkat i HuT-78) metodą elektroporacji.
Wprowadzanie siRNA do limfocytów T (Jurkat i HuT-78) metodą elektroporacji. Przepis.
-
Otrzymywanie komórek kompetentnych i transformacja E. coli metodą rubidowo-wapniową
Otrzymywanie komórek kompetentnych i transformacja E. coli metodą rubidowo-wapniową Przepis.
-
Przygotowanie odczynników chemiluminescencyjnych (ECL)
Przygotowanie substratu dla peroksydazy chrzanowej
-
Pandemia grypy H1N1 z roku 1918: wgląd w XXI wiek
Wirus grypy A H1N1, siejący spustoszenie na świecie w latach 1918-1919 dał początek wielkiej rodzinie wirusów, a jego potomkowie nadal krążą po świecie.
-
Bimolecular fluorescence complementation- przyżyciowe obrazowanie białek.
Opis metody fluorescyjnego dopełniania BiFC (bimolecular fluorescence complementation).
-
Liczenie żywych komórek z wykorzystaniem komory zliczeniowej wg Neubauer-improved.
Liczenie komórek z użyciem trypanu blue pozwala na łatwe odróżnienie żywych od martwych komórek.
-
Barwienie szkieletu aktynowego i jąder komórkowych.
Barwienie filamentów aktynowych z użyciem Phaloidinu -dobra alternatywa dla przeciwciał.
-
Western-blot (immuno-blotting)
Western-blott jest metodą rozdziału białek z wykorzystaniem elektroforezy żelowej.
-
Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym (Coomassie blue)
Barwienie coomassie. Stosujemy je w celu uwidocznienia wszystkich białek po rozdziale elektroforetycznym.
-
Transfer białek na membranę i immunodetekcja białek
Przeniesienie białek z żelu na membranę i immunodetekcja białek przeciwciałami.
-
Western-blotting- przepis
Elektroforetyczny rozdział białekel, ektrotransfer i immunodetekcja białek
-
Oznaczanie jakości RNA bardzo ważny krok w badaniach molekularnych
Kluczowe znaczenie dla eksperymentu ma dobre oznaczenie jakości RNA ponieważ jakość RNA ma bezpośredni wpływ na wynik doświadczenia.
-
Western blotting- teoria
Elektroforetyczny rozdział białek. Transfer białek na membranę. Immunodetekcja białek.
-
Chromatografia powinowactwa
Chromatografia powinowactwa stosowana jest do rozdziału białek ze względu na powinowactwo do specyficznych ligandów związanych ze złożem.
-
Chromatografia żelowa
Chromatografia żelowa zwana również filtracją żelową stosowana jest do rozdziału białek różniących się masą cząsteczkową lub do oddzielania białek od składników niskocząsteczkowych.
-
Bankowanie i rozmrażanie linii komórkowych
Przygotowanie komórek do bankowania i rozmrażanie ich - podstawowy krok pracy z liniami komórkowymi.
-
Oznaczanie żywotności komórek metodą MTT
Zasada testu opiera się na reakcji, która zachodzi w żywych komórkach i polega na redukcji żółtego rozpuszczalnego bromku do błękitnego formazanu.
-
Proteomika
Nazwa proteomika wprowadzona w połowie lat 90 XX wieku pochodzi od angielskiego PROTein complement of the genOME (komponent białkowy kodowany przez genom).
-
ELISA (ang. enzyme-linked immunosorbent assay)
Test ELISA jest jednym z najpowszechniej stosowanych testów immunoenzymatycznych. Wykonuje się go na 96 dołkowych płytkach (polistyrenowych lub pleksiglasowych). Stosuje się wiele różnych wariantów testu ELISA, poniżej przedstawiono wybrane z nich.
-
Interferencja RNA
Interferencja RNA to proces wyciszania genów poprzez małe około 22-26 nukleotydowe RNA powstające z dwuniciowego prekursorowego RNA.
-
Izolacja RNA z tkanek utrwalonych w parafinie (FFPE, formalin-fixed, paraffin-embedded)
Z uwagi na trudności z pozyskiwaniem próbek tkanek do analizy bezpośrednio z sekcji, bardzo wartościowym materiałem wydają się być zbiory tkanek utrwalonych formaliną.
-
Pomiar aktywności syntazy cytrynianowej oraz oksydazy cytochromu c
Opis metody pomiaru aktywności syntazy cytrynianowej oraz oksydazy cytochromu c.
-
Komórki nowotworowe in vivo a in vitro
Molekularna analiza nowotworowych lini komórkowych dostarcza ważnych informacji o biologii raków z których pochodzą. Ale czy hodowle in vitro odzwierciedlają dokładnie właściwości komórek nowotworowych in vivo?
-
Izolacja białek komórkowych (wszystkie białka)
Izolacja całościowych lizatów komórkowych w buforze Laemmli'ego.
-
Analiza typu Northern Blot
Metoda Northern Blot: znakowanie sondy DNA, przygotowanie żelu i elektroforeza, hybrydyzacja i detekcja zhybrydyzowanej sondy.
-
Badanie aktywności hemolitycznej białek
Metoda hemolizy kontaktowej i badanie aktywności hemolitycznej oczyszczonych białek.
-
Przygotowanie bakterii elektrokompetentnych (E.coli)
Opis przygotowania bakterii elektrokompetentnych (E.coli) do elektroporacji.
-
Bankowanie komórek bakteryjnych.
Przygotowanie komórek bakteryjnych do bankowania- podstawowy krok pracy z bakteriami.
-
Elektroforetyczny rozdział białek
Elektroforeza polega na rozdziale mieszaniny makrocząsteczek pod wpływem przyłożonego pola elektrycznego.
-
Chromatografia jonowymienna
Chromatografia jonowymienna stosowana jest do rozdziału związków na podstawie różnicy ich ładunku elektrycznego.
-
Izolacja plazmidowego DNA metodą lizy alkalicznej.
Izolacji plazmidowego DNA metodą lizy alkalicznej- opis metody.
-
Izolacja białek metodą dezintegracji błon komórkowych ultradźwiękami
Otrzymywanie całościowych lizatów bakteryjnych metodą dezintegracji błon komórkowych ultradźwiękami.
-
Oznaczanie długości ogonów poli(A)
Mechanizm obróbki mitochondrialnych transkryptów w komórkach ssaczych powoduje tworzenie wolnej grupy hydroksylowej na końcu 3' oraz pojedynczej grupy fosforanowej na końcu 5' cząsteczki mRNA.
-
Pomiar szybkości glikolizy oraz potencjału oksydoredukcyjnego
Opis metody pomiaru szybkości glikolizy oraz potencjału oksydoredukcyjnego.
-
Wprowadzanie DNA do wnętrza komórek (LipofectAMINE)
Wprowadzanie DNA do wnętrza komórek przy użyciu lipofektaminy.
-
Znakowanie przeciwciał pierwszorzędowych enzymem (fosfatazą alkaliczną)
Bezpośrednie metody immunologiczne wymagają użycia przeciwciała pierwszorzdorzędowego związanego z odpowiednim enzymem.
-
Oczyszczanie przeciwciał metodą chromatografii powinowactwa
Metoda oczyszczania przeciwciał metodą chromatografii powinowactwa z wykorzystaniem
-
Stabilność RNA a sposób przechowywania tkanek
Wiele metod bazujących na pracy z RNA wymaga dobrej jakości pozyskanego materiału. Sposób przechowywania tkanek ma istotny wpływ na jakość RNA.
Zapraszamy...
Najpopularniejsze(wszystkie...)
Elektroforetyczny rozdział białek
(odsłon: 10475)Western blotting- teoria
(odsłon: 9609)Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym (Coomassie blue)
(odsłon: 9566)Western-blotting- przepis
(odsłon: 9177)Transfer białek na membranę i immunodetekcja białek
(odsłon: 8871)
Tagi(wszystkie...)
bakterie białka biochemia biologia molekularna biotechnologia biotechnologia medyczna bloczki parafinowe chemiluminescencja chromatografia DNA immunodetekcja in vitro izolacja izolacja białek izolacja RNA-DNA kwasy nukleinowe linie komórkowe medycyna mitochondria nowotwory oczyszczanie ogłoszenia oprogramowanie PCR precypitacja przeciwciała RNA siRNA transfekcja wirusy
Copyright 2007-2010 Metlab.pl , Wszystkie prawa zastrzeżone